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生化检验 临床蛋白电泳基本技术

时间:2011-11-28 11:51来源:临床医学检验技术考试 作者:lengke 点击:
  

  1.醋酸纤维素薄膜电泳

  醋酸纤维素是指纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯,由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维薄素薄膜。它具有电渗小、分离速度快、分离清晰、血清用量少及操作简便等优点,现已广泛用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白和同工酶等的分离和测定。

  2.凝胶电泳

  凝胶电泳根据支持介质的不同可分为淀粉胶、琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳等。琼脂糖凝胶孔径较大,对蛋白质一般不起分子筛作用,适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛作用,有更高的分辨率,普遍用于分离蛋白质及小分子核酸。

  3.等电聚焦电泳(isoelectricfocusing,IEF)

  等电点是蛋白质的一个重要性质,测定等电点的方法是在不同pH条件下测量蛋白质的电泳迁移率,然后用迁移率对pH作图,对应于迁移率为零的pH就是蛋白质的等电点。按照蛋白质等电点不同而进行分离的电泳方法称为蛋白质等电聚焦电泳。由于其分辨率可达到0.01pH单位,故特别适用于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。

  4.毛细管电泳(capillaryelectrophoresis,CE)

  毛细管电泳是八十年代初发展起来的一类高效、快速分离分析方法。同其它技术相比,毛细管电泳具有分辨率高、塔板数高、选择性好、定量准确、所需样品少等特点。毛细管电泳将电泳载体移到毛细管中后,克服了传统电泳的热扩散和试样扩散的难题,大大提高了分析的灵敏度。因而它是一种比传统电泳优越得多的分离分析技术。毛细管电泳可分为毛细管区带电泳、凝胶电泳、等速电泳、等电聚焦和胶束电动色谱等。

  在生命科学中广泛使用的是毛细管区带电泳(capillaryzoneelectrophoresis,CZE)。毛细管区带电泳是近年发展起来的一种高效、快速的液相分离分析技术,有分离选择性高、检测灵敏度高、分离快速、操作简便和易自动化等特点,现已开始在临床实验诊断中得到逐步地应用。

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